¿Cómo se conservan los óvulos y embriones humanos para futuros tratamientos de fertilidad?
La criopreservación de óvulos y embriones humanos es una parte esencial de los tratamientos de fertilidad. La vitrificación, una técnica de congelación rápida, se ha convertido en el método preferido porque ayuda a mantener la estructura y función de estas células. Este artículo explica cómo funciona este proceso, qué se necesita para realizarlo correctamente y cuáles son las recomendaciones para garantizar los mejores resultados.
Sección 1: La importancia de la formación del personal
El éxito de la vitrificación depende en gran medida de la experiencia de los embriólogos, los profesionales que realizan este proceso. Por eso, la formación de nuevos empleados es un paso crucial. Los principiantes son entrenados por embriólogos altamente experimentados, quienes evalúan su competencia basándose en indicadores de calidad y su comprensión de los principios básicos de la vitrificación. Estos principios incluyen el control de la concentración de crioprotectores, la temperatura de operación y la velocidad de enfriamiento y calentamiento.
El entrenamiento tiene varias etapas. Primero, los aprendices practican con embriones de ratón de ocho células, que son menos sensibles a la vitrificación y descongelación. El estándar de entrenamiento exige que la tasa de supervivencia de estos embriones de ratón no sea menor que la de los embriones humanos en la misma clínica. Después de descongelar, los embriones de ratón se cultivan durante 24 a 48 horas, y la tasa de formación de blastocistos (una etapa avanzada del desarrollo embrionario) debe ser al menos del 80%.
Luego, los aprendices trabajan con óvulos o embriones humanos descartados para familiarizarse con su tamaño, forma y manejo durante la vitrificación y descongelación. Finalmente, se les permite manejar una pequeña cantidad (inicialmente el 20%) de óvulos o embriones de pacientes bajo supervisión. Este enfoque gradual asegura que los aprendices adquieran confianza y competencia antes de trabajar con muestras valiosas.
Sección 2: Elección y uso de reactivos y materiales
La selección de reactivos y materiales es clave para el éxito de la vitrificación. Se recomienda utilizar reactivos de vitrificación y descongelación disponibles comercialmente, con información de registro adecuada. Estos productos deben pasar por controles de calidad, como pruebas con embriones de ratón, pruebas de endotoxinas bacterianas, pruebas de esterilidad y mediciones de pH y osmolaridad. Los laboratorios de fertilidad deben tener dos marcas diferentes de reactivos de vitrificación y descongelación para enfrentar emergencias, como lotes defectuosos o falta de suministro.
Los portadores de criopreservación se clasifican en abiertos y cerrados, dependiendo de si la muestra entra en contacto directo con el nitrógeno líquido. Se recomiendan portadores cerrados o recipientes separados para gametos (óvulos o espermatozoides) y embriones de pacientes con infecciones o portadores de infecciones. Esta precaución minimiza el riesgo de contaminación cruzada.
Sección 3: Procesos de vitrificación y descongelación para óvulos, embriones en etapa de división y blastocistos
Vitrificación de óvulos
La vitrificación de óvulos implica varios pasos preparatorios. Los reactivos de vitrificación deben estar a temperatura ambiente (24°C–26°C). Los óvulos suelen vitrificarse 38 a 40 horas después de la inyección de gonadotropina coriónica humana y se desnudan (eliminan las células circundantes) justo antes de la criopreservación. Los óvulos inmaduros pueden someterse a un cultivo de maduración in vitro durante 24 a 48 horas antes de la vitrificación. Sin embargo, no se recomienda criopreservar óvulos gigantes o aquellos con discos de retículo endoplásmico liso. Cada portador no debe contener más de cinco óvulos.
El proceso de vitrificación de óvulos incluye los siguientes pasos:
- Preparar gotas adyacentes de Solución Básica (SB) y Solución de Equilibrio (SE) en la tapa de una placa de Petri, con un volumen de al menos 150 µL por gota. Transferir los óvulos a la gota de SB, conectar las gotas y dejarlos en el centro durante 3 minutos.
- Preparar una nueva gota de SE y conectarla con las gotas anteriores. Mover los óvulos al centro de la gota conectada y dejarlos durante 3 minutos.
- Preparar otra gota de SE (volumen ≥40 µL) en una placa de Petri separada y cubrirla con aceite (≥3 mL). Transferir los óvulos a esta gota y dejarlos durante 6 a 9 minutos hasta que el espacio perivitelino vuelva a su tamaño original.
- Preparar varias gotas de Solución de Vitrificación (SV) (volumen ≥40 µL) en otra placa de Petri. Transferir los óvulos a al menos 3 a 5 posiciones diferentes en la SV para eliminar el SE residual.
- Cargar los óvulos en el portador según las instrucciones del fabricante. Los pasos 4 y 5 deben completarse en 45 a 60 segundos.
Vitrificación de embriones en etapa de división y blastocistos
La vitrificación de embriones en etapa de división y blastocistos puede realizarse a temperatura ambiente (24°C–26°C) o a 37°C. Los reactivos, el aceite y las placas de Petri deben calentarse, y se debe preparar una placa con SB y SE. Cada portador no debe contener más de dos embriones en etapa de división o blastocistos, y se recomienda cargar un solo blastocisto de alta calidad por portador. Los embriones elegibles para vitrificación incluyen embriones utilizables en etapa de división del día 2 al 3 y blastocistos utilizables del día 5 al 7.
El proceso de vitrificación de embriones incluye los siguientes pasos:
- Transferir los embriones a la SB y dejarlos durante 1 minuto (opcional).
- Transferir los embriones al centro de la gota de SE. Los embriones caerán libremente y deben dejarse durante el período correspondiente según la temperatura de operación. Este paso se completa cuando el embrión vuelve a su tamaño original.
- Preparar varias gotas de SV en otra placa de Petri. Transferir los embriones a al menos 3 a 5 posiciones diferentes en la SV para eliminar el SE residual.
- Cargar los embriones en el portador.
Descongelación de óvulos, embriones en etapa de división y blastocistos
El proceso de descongelación incluye los siguientes pasos:
- Preparar una gota de Solución de Descongelación (SD) (≥200 µL) en una placa de Petri, cubrirla con aceite y calentarla a 37°C.
- Preparar varias gotas de Solución de Dilución (SDi) y SB en una placa de Petri, cubrirlas con aceite y mantenerlas a temperatura ambiente.
- Retirar el portador del nitrógeno líquido y sumergirlo rápidamente (en menos de 1 segundo) en la SD, dejando los óvulos/embriones durante 45 a 60 segundos. Si la muestra flota, moverla al centro de la gota.
- Transferir la muestra a la SDi y dejarla durante 3 minutos. Nota: Se debe llevar una pequeña cantidad del líquido primario durante la transferencia.
- Transferir la muestra a la SB y dejarla durante 5 minutos.
- Transferir la muestra a una nueva SB y dejarla durante 5 minutos.
El momento de las operaciones posteriores a la descongelación es crítico. La inyección intracitoplasmática de espermatozoides debe realizarse 2 a 3 horas después de la descongelación de óvulos. Los embriones en etapa de división pueden descongelarse un día antes o el día de la transferencia embrionaria. Para los blastocistos, se recomienda realizar la transferencia embrionaria 2 horas después de la descongelación para observar la reexpansión del blastocisto, lo que ayuda a evaluar su supervivencia.
Sección 4: Reducción artificial de blastocistos
La reducción artificial de blastocistos es una técnica que mejora los resultados de la vitrificación. La reducción con láser es ampliamente utilizada por su simplicidad. La posición para el láser debe ser la unión celular del trofectodermo, lejos de la masa celular interna. La intensidad del láser debe ajustarse según las condiciones específicas de cada dispositivo, y 1 a 2 pulsos suelen ser suficientes. Los blastocistos pueden vitrificarse después de 10 a 15 minutos de reducción artificial. La duración no debe ser demasiado larga para evitar la reexpansión del blastocisto.
Sección 5: Asistencia en la eclosión
La asistencia en la eclosión es una técnica que facilita la implantación del embrión. Se recomienda el adelgazamiento láser de la zona pelúcida (ZP) para embriones en etapa de división o mórulas, reduciendo el grosor de la ZP en un 50% a 80% en el 25% al 50% de la circunferencia de la ZP. La perforación láser de la ZP se realiza en blastocistos clasificados como 4 a 6, con una apertura del 25% al 50% de la circunferencia de la ZP. El adelgazamiento de la ZP también puede realizarse en blastocistos en etapas tempranas y de expansión (clasificados como 1 a 3) debido a su ZP gruesa.
Sección 6: Gestión de la calidad
Definición de supervivencia exitosa
Los criterios de supervivencia exitosa varían según el tipo de célula:
- Óvulo: Un óvulo sobreviviente debe exhibir una morfología normal de la membrana celular y un citoplasma claro. Características negativas, como citoplasma oscurecido, vacuolización masiva, fuga de citoplasma o espacio perivitelino anormal, indican daño o degeneración durante la vitrificación y descongelación.
- Embrión en etapa de división: La supervivencia se define como al menos la mitad de las blastómeras (células embrionarias) intactas después de la descongelación. La supervivencia total significa que todas las blastómeras están intactas.
- Blastocisto: La supervivencia se define como ≥75% de las células intactas o la reexpansión del blastocele (cavidad del blastocisto) dentro de las 2 horas posteriores a la descongelación.
Indicadores clave de rendimiento
El monitoreo sistemático de los indicadores clave de rendimiento (KPI, por sus siglas en inglés) es esencial para evaluar la efectividad de los procesos de vitrificación y descongelación e identificar riesgos potenciales. Los KPI incluyen tasas de supervivencia, tasas de formación de blastocistos y otras métricas relevantes. Los valores de competencia representan los niveles mínimos aceptables de rendimiento, mientras que los valores de referencia denotan objetivos aspiracionales. Las estadísticas de KPI deben compilarse idealmente cada mes, aunque los laboratorios pueden ajustar la frecuencia según su carga de trabajo. Las anomalías en los KPI, como valores por debajo de los niveles de competencia o dos desviaciones estándar por debajo del promedio del año anterior, requieren una investigación detallada.
Sección 7: Límite de tiempo para la criopreservación
El tiempo óptimo de almacenamiento para óvulos y embriones criopreservados se determina en función de las tasas de supervivencia, los resultados de embarazo, las consideraciones éticas y el uso eficiente de los recursos médicos. El tiempo de almacenamiento recomendado para óvulos vitrificados es de no más de 1 año, mientras que para los embriones es de no más de 5 años.
Conclusión
Este consenso proporciona un conjunto completo de pautas para la vitrificación de óvulos y embriones humanos, cubriendo todos los aspectos desde la formación del personal hasta la gestión de la calidad y los límites de almacenamiento. Al seguir estas pautas, los centros de fertilidad pueden mejorar la calidad de sus servicios y lograr mejores resultados para los pacientes.
doi.org/10.1097/CM9.0000000000002895
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